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| 產(chǎn)地 | 進口、國產(chǎn) | 
| 保存條件 | 低溫冷藏 | 
| 品牌 | 帛科 | 
| 貨號 | E0374 | 
| 用途 | 公司產(chǎn)品僅用于科研 | 
| 組織來源 | 非小細胞肺癌;淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移;男性 | 
| 細胞形態(tài) | 詳見說明書 | 
| 是否是腫瘤細胞 | 否 | 
| CAS編號 | |
| 保質(zhì)期 | 詳見說明書 | 
| 器官來源 | 詳見說明書 | 
| 免疫類型 | 詳見說明書 | 
| 品系 | 詳見說明書 | 
| 生長狀態(tài) | 貼壁 | 
| 物種來源 | 人 | 
| 包裝規(guī)格 | 1×106 | 
| 純度 | 詳見說明書% | 
| 是否進口 | 是 | 
產(chǎn)品簡稱:NCI-H1770 細胞
 中文名稱:人非小細胞細胞
規(guī)格:1×106
種屬:人
來源:非小細胞;淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移;男性
培養(yǎng)基:1640
狀態(tài):懸浮
單位:T25/瓶
貨號:E0374
產(chǎn)品名稱  | 規(guī)格  | 貨號  | 
NCI-H1770 細胞  | 1×106  | E0374  | 
帛科細胞培養(yǎng)器材的選擇:從培養(yǎng)量大小來講,從小到大有細胞培養(yǎng)板、細胞反應(yīng)管、搖瓶、細胞培養(yǎng)瓶、細胞工廠等,更大就是反應(yīng)器了。
 
帛科細胞培養(yǎng)瓶培養(yǎng)面積從25-225平方厘米不等,一般都經(jīng)過表面改性處理,適合細胞貼壁和生長。225ml 、175ml的多用于大規(guī)模培養(yǎng)時用(如單克隆細胞的培養(yǎng)等),75ml的多用于一般性細胞實驗用(一般性的傳代,保存細胞,為實驗提供細胞等),25ml一般是用來復(fù)蘇細胞或細胞較少時的培養(yǎng),還有做原代細胞時也可以做多瓶而避免交叉污染。產(chǎn)品僅用于科研
 細胞培養(yǎng)的具體步驟和注意事項:
 1.細胞復(fù)蘇
 將凍存細胞從液氮中取出后,在37℃水浴鍋內(nèi)不斷搖動促進其融化。將融化的細胞移入離心管中,加入37oC預(yù)熱的DMEM完全培養(yǎng)基中(其中胎牛血清約為10%),輕輕吹勻,離心,500g離心2min,棄上清液。
 加入DMEM完全培養(yǎng)基清洗,棄上清液。加入DMEM完全培養(yǎng)基,輕輕吹打混勻,制成細胞懸液,接種于培養(yǎng)皿/瓶中,在含5% CO2的細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
 2.細胞傳代
 帛科細胞密度達到80%~90%(過量不足,過晚細胞狀態(tài)不佳,1:2至1:10以上的比率傳代培養(yǎng),一般1:3至1:5細胞一代,即從細胞接種到分離再培養(yǎng)的一段時間,非細胞有絲分裂次數(shù))時,去掉完全培養(yǎng)基,用1X PBS清洗2次。
 加入胰蛋白酶(注意:消化液的量以蓋住細胞*,*消化溫度是37oC。顯微鏡下觀察細胞:倒置顯微鏡下觀察消化細胞,若胞質(zhì)回縮,細胞之間不再連接成片,表明此時細胞消化適度)進行消化,放入細胞培養(yǎng)箱中約2-3min。 
 加入適量DMEM完全培養(yǎng)基終止胰蛋白酶消化,轉(zhuǎn)移至離心管后500g離心2min,棄上清液,再加入DMEM完全培養(yǎng)基清洗,棄上清液。
 加入DMEM完全培養(yǎng)基,輕輕吹打混勻,吸取10微升進行計數(shù),然后按照所需細胞量在含5% CO2的細胞培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)。
 
 3.細胞凍存
 當細胞密度達到80%~90%時,去掉完全培養(yǎng)基,用1X PBS清洗2次。加入胰蛋白酶進行消化,放入細胞培養(yǎng)箱中約2-3min。加入DMEM完全培養(yǎng)基終止胰蛋白酶消化,轉(zhuǎn)移至離心管后500g離心2min,棄上清液,再加入DMEM完全培養(yǎng)基清洗,棄上清液。加入lml凍存液(90%胎牛血清,10% DMSO。 
 一般來講血清含量可以在10%-90%之間調(diào)整,凍存液中加入血清一方面可以為細胞提供營養(yǎng),另一方面可以在細胞凍存過程中提供非滲透性保護物質(zhì),如蔗糖,白蛋白等從而更好地保護細胞),放入凍存管內(nèi)(管內(nèi)有異丙醇,以保證溫度降低的速度),立即放入4oC冰箱中凍存30min,然后放入-20oC冰箱中凍存30min,再置于-80℃冰箱內(nèi)過夜。
 *天放入液氮中,可以保存至少兩年,如不放人液氮,可以保存三個月。 
 細胞凍存和復(fù)蘇的原則是:慢凍速融,這樣更加有利于保持細胞的活力。凍存細胞不加任何保護劑,會導(dǎo)致細胞內(nèi)冰晶的產(chǎn)生,從而使細胞產(chǎn)生內(nèi)源性的機械損傷,引起細胞內(nèi)環(huán)境滲透壓,PH,電解質(zhì)等的改變,進而促使細胞死亡。
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 注意事項:
 NCI-H1770 細胞(1)預(yù)熱培養(yǎng)用液:把已經(jīng)配制好的裝有培養(yǎng)液、PBS和胰蛋白酶的瓶子放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱;
 (2)用75%酒精擦拭經(jīng)過紫外線照射的超凈工作臺和雙手;
 (3)正確擺放使用的器械:保證足夠的操作空間,不僅便于操作而且減少污染;
 (4)點燃酒精燈:注意火焰不能太?。?/span>
 (5)嚴格的無菌操作;
 (6)貼壁細胞消化適度:消化的時間受消化液的種類、配制時間、加入培養(yǎng)瓶中的量等諸多因素的影響,消化過程中應(yīng)該注意培養(yǎng)細胞形態(tài)的變化,一旦胞質(zhì)回縮,連接變松散,或有成片浮起的跡象就要立即終止消化;
 (7)傳代細胞所有的操作盡量靠近酒精燈火焰。每次*只進行一種細胞的操作,每種細胞使用一套器材。避免交叉感染;
 (8)傳代細胞瓶口每次打開或者關(guān)閉都需要在酒精燈上消毒。